細(xì)胞名稱：THLE-2SV40轉(zhuǎn)化人肝上皮細(xì)胞ATCC

細(xì)胞代次：P4

細(xì)胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)）

細(xì)胞凍存：無(wú)血清凍存液

細(xì)胞傳代：第一次建議1:2

收到貨后處理：

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運(yùn)輸細(xì)胞的 辦法。收到細(xì)胞用75%酒精噴灑整個(gè)細(xì)胞瓶,消毒后

放到超凈臺(tái)內(nèi)嚴(yán)格無(wú)菌操作,將細(xì)胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)后再做處

理。顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存( 40x,100x,200x各一張),前三天照片是重要售

后依據(jù),不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。(傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基,以便進(jìn)

行對(duì)比培養(yǎng),換液擰松瓶蓋),該細(xì)胞的STR鑒定可向客服咨詢索取。

培養(yǎng)步驟

a、細(xì)胞傳代:如果未超過(guò)80%匯合度時(shí),將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中,留5ml培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵

箱培養(yǎng);如果細(xì)胞密度超80%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),

1)對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 添加0.25%ydbm消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞

消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞,使之脫落后吸出,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液

,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基重懸。

4. 將細(xì)胞懸液按1:2的比例進(jìn)行分瓶傳代(兩個(gè)T25瓶),補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶, 放入到37℃、5%CO2的細(xì)

胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2、對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2的比例

分到新的含8ml培養(yǎng)基的新瓶中。

方法二:可選擇半換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新瓶

中。

b、細(xì)胞凍存:

1、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;

2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化,再輕

輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心 5min;

3、 棄上清,沉淀細(xì)胞加入1ml的雅吉生物無(wú)血清凍存液(貨號(hào):C7001),混勻后加入凍存管中。

4、 將凍存細(xì)胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,則需在-80℃冰箱 中存放24小時(shí)以上

再轉(zhuǎn)入液氮罐中。C、細(xì)胞復(fù)蘇:

1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意佩戴防護(hù)面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無(wú)結(jié)晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

C、細(xì)胞復(fù)蘇:

1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意佩戴防護(hù)面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無(wú)結(jié)晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：有些細(xì)胞比較特殊，如貼壁不牢，在運(yùn)輸過(guò)程中發(fā)生容易細(xì)胞脫落，這是正?，F(xiàn)象。請(qǐng)將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過(guò)渡培養(yǎng)（后期對(duì)比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個(gè)T25），補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

YS1722CMLE-12小鼠肺上皮細(xì)胞

YS1723C 9L小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞

YS1724C Toledo人B淋巴細(xì)胞株瘤

YS1725C BJAB人B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞

YS1726C RCHACVRCHACV細(xì)胞系

YS1727C MUTZ-1細(xì)胞系

YS1728C HPBALLT細(xì)胞白血病細(xì)胞

YS1729C JMSU1JMSU1細(xì)細(xì)胞系

YS1730C TALL-1細(xì)胞系

YS1731C SKM-1人骨髓增生異常綜合征細(xì)胞株

YS1732C KMS28BMKMS28BM細(xì)胞

YS1733C KMS34KMS34細(xì)胞

YS1734C KMS26人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞

YS1735C KMS11人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞

YS1736C RGM-1正常胃粘膜上皮細(xì)胞

YS1737C LNCaPcloneFGC人前列腺細(xì)胞

YS1738C CF-1小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

YS1739C VX2兔肝鱗癌腫瘤細(xì)胞

YS1740C BMSC人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞

YS1741C G422小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞

YS1742C ZYM-DIEC02豬小腸上皮細(xì)胞

YS1743C KOBKOB細(xì)胞系

YS1744C CAL-148人乳腺癌細(xì)胞

YS1745C CAL-51人乳腺癌細(xì)胞

YS1746C THLE-3SV40轉(zhuǎn)化人肝上皮細(xì)胞

YS1747C THLE-2SV40轉(zhuǎn)化人肝上皮細(xì)胞

YS1748C SCC-25人舌鱗癌細(xì)胞

YS1749C SCC-4人舌鱗癌細(xì)胞

YS1750C SCC-9人舌鱗癌細(xì)胞

YS1751C SCC-090人口腔鱗癌細(xì)胞

YS1752C RBE4大鼠腦血管內(nèi)皮細(xì)胞

YS1754C SCC-15人舌磷癌細(xì)胞

YS1755C DOK人口腔黏膜癌前病變細(xì)胞

YS1756C C4-2B人前列腺癌細(xì)胞

YS1757C C4-2人前列腺癌細(xì)胞

YS1758C OCI-AML3人急性髓細(xì)胞性白血病細(xì)胞

YS1759C KG-1a人急性骨髓白血病細(xì)胞

YS1760C HTR8-SVneo人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞

YS1761C RT4-D6P2T大鼠神經(jīng)雪旺氏細(xì)胞

YS1762C IPI-2I豬回腸上皮細(xì)胞

YS1763C OP9-DL1小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞

YS1764C ARPE-19人視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞

YS1765C hTERT-RPE1人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞

YS1766C PIG3原代人皮膚黑色素細(xì)胞

YS1767C PIG1原代正常人皮膚黑色素細(xì)胞

YS1768C SNK6人NK/T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞

YS1769C EHEB慢性B細(xì)胞白血病

YS1770C 小鼠心肌成纖維細(xì)胞

YS1771C MES-SA人子宮肉瘤細(xì)胞

YS1772C HEEC人正常食管上皮細(xì)胞

YS1773C PA-TU-8988S人胰腺癌細(xì)胞

YS1774C RLE-6TN大鼠肺上皮Ⅱ型細(xì)胞

YS1775C HN13人口腔鱗狀細(xì)胞癌

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