細(xì)胞名稱：DB人彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞ATCC

細(xì)胞代次：P4

細(xì)胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細(xì)胞凍存：無血清凍存液

細(xì)胞傳代：第一次建議1:2

培養(yǎng)步驟

a、細(xì)胞傳代:如果未超過80%匯合度時,將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中,留5ml培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵

箱培養(yǎng);如果細(xì)胞密度超80%,即可進行傳代培養(yǎng),

1)對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 添加0.25%ydbm消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞

消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞,使之脫落后吸出,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液

,補加1-2mL培養(yǎng)基重懸。

4. 將細(xì)胞懸液按1:2的比例進行分瓶傳代(兩個T25瓶),補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶, 放入到37℃、5%CO2的細(xì)

胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2、對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2的比例

分到新的含8ml培養(yǎng)基的新瓶中。

方法二:可選擇半換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新瓶

中。

b、細(xì)胞凍存:

1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;

2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化,再輕

輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心 5min;

3、 棄上清,沉淀細(xì)胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液(貨號:C7001),混勻后加入凍存管中。

4、 將凍存細(xì)胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,則需在-80℃冰箱 中存放24小時以上

再轉(zhuǎn)入液氮罐中。C、細(xì)胞復(fù)蘇:

1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意佩戴防護面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

C、細(xì)胞復(fù)蘇:

1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意佩戴防護面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項：有些細(xì)胞比較特殊，如貼壁不牢，在運輸過程中發(fā)生容易細(xì)胞脫落，這是正常現(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

收到貨后處理：

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細(xì)胞的 辦法。收到細(xì)胞用75%酒精噴灑整個細(xì)胞瓶,消毒后

放到超凈臺內(nèi)嚴(yán)格無菌操作,將細(xì)胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)后再做處

理。顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照保存( 40x,100x,200x各一張),前三天照片是重要售

后依據(jù),不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。(傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基,以便進

行對比培養(yǎng),換液擰松瓶蓋),該細(xì)胞的STR鑒定可向客服咨詢索取。

YS2087CNCI-H522[H522]人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

YS2088CMCA-205小鼠纖維肉瘤細(xì)胞

YS2089CHOSEpiC人卵巢上皮細(xì)胞

YS2090CTCMK-1小鼠腎小管上皮細(xì)胞

YS2091CSW260人結(jié)腸癌細(xì)胞

YS2092CB10BR小鼠黑素細(xì)胞

YS2093CND7/23大鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞

YS2094CRGCs大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞

YS2095CRPMI2650人鼻腔上皮細(xì)胞

YS2096CNCI-H69人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

YS2097CmRTEC小鼠腎小管上皮細(xì)胞

YS2098CNb2-11小鼠淋巴瘤細(xì)胞

YS2099CH-EMC-SS人軟骨肉瘤細(xì)胞

YS2100CTFK-1人膽管癌細(xì)胞

YS2101CHRC99人直腸腺癌細(xì)胞（中分化）

YS2102CHR8348人直腸腺癌細(xì)胞（低分化）

YS2103CSTO小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

YS2104CHCC1954人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞

YS2105CHCC1954BL人外周血B細(xì)胞

YS2106CHCC1419人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞

YS2107CHPAEC人肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞

YS2108CDiFi人結(jié)直腸癌細(xì)胞

YS2109CXWLC-05人肺腺癌細(xì)胞

YS2110CMKN-28人胃癌細(xì)胞

YS2111CWB-F344大鼠肝干細(xì)胞

YS2112ChEEC人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞

YS2113CPG13逆轉(zhuǎn)錄病毒包被的TK-NIH3T3細(xì)胞

YS2114CHEH2人胚胎心臟成纖維樣細(xì)胞

YS2115CIMR-90人胚肺成纖維細(xì)胞

YS2116CSUP-T1人T淋巴母細(xì)胞瘤細(xì)胞

YS2117C1301人淋巴細(xì)胞

YS2118CMTEC1小鼠胸腺上皮細(xì)胞

YS2119CAZ521人胃癌細(xì)胞

YS2120CFL62891人肝細(xì)胞

YS2121CSIRC兔角膜上皮細(xì)胞

更多細(xì)胞歡迎咨詢我們：DB人彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞ATCC